1.香蕉视频91色版合成的基本原理?
香蕉视频91色版固相合成法是香蕉视频91色版合成化学的一个重大的突破。它的最大特点是不必纯化中间产物,合成过程可以连续进行,进而为香蕉视频91色版合成的自动化奠定了基础。目前全自动香蕉视频91色版的合成,基本都是固相合成。其基本过程如下:
基于Fmoc化学合成,先将所要合成的目标香蕉视频91色版的C-端91香蕉视频下载安装的羧基以共价键形式与一个不溶性的高分子树脂相连,然后以这一91香蕉视频下载安装的氨基作为香蕉视频91色版合成的起点,同其它的91香蕉视频下载安装已经活化的羧基作用形成肽键,不断重复这一过程,即可得到香蕉视频91色版。根据香蕉视频91色版的91香蕉视频下载安装组成不同,香蕉视频91色版后处理方式不同,纯化方式也有差异。
2.香蕉视频91色版状态是如何?如何保存储存?
香蕉视频91色版提供的香蕉视频91色版是粉末状,一般为灰白色,组成不同,香蕉视频91色版粉末的颜色有差异,香蕉视频91色版一般长期保存需要避光保存,并应保存在-20度,短期可以保存在4度。可以短时间的话是以室温运输。
3.如何溶解香蕉视频91色版?
因为香蕉视频91色版溶解比较复杂,通常是先取一点试验,在没有确定合适的溶剂前请勿全部溶解。
下列为选择溶解溶剂的一般方法:
(1)判定香蕉视频91色版的电荷特定,设定酸性91香蕉视频下载安装Asp(D),Glu(E)和C端COOH为-1;碱性91香蕉视频下载安装Lys(K),Arg(R),His(H)及N端NH2为+1,其它91香蕉视频下载安装的电荷为0。计算出净电荷数。
(2)如果净电荷数 >0,香蕉视频91色版为碱性,用水溶解:如果不溶解或溶解性不大,加入醋酸(10%以上);如果香蕉视频91色版还不能溶解,加入少量TFA(25ul)溶解,然后加入500ul水稀释。
(3)如果净电荷数<0,香蕉视频91色版为酸性,用水溶解;如果不溶解或溶解性不大,加入氨水(25ul)溶解,然后加入500ul水稀释。
(4)如果净电荷数=0,香蕉视频91色版为中性,一般需要用有机溶剂如乙腈,甲醇或异丙醇,DMSO等溶解。还有人建议需要尿素来溶解疏水性很大的香蕉视频91色版。
4.非HPLC纯化的香蕉视频91色版和经过HPLC纯化的香蕉视频91色版有何区别?
粗品和脱盐级别的香蕉视频91色版中杂质为香蕉视频91色版和非香蕉视频91色版类:如非全长香蕉视频91色版和香蕉视频91色版后处理的一些原料如DTT、TFA等;而经过HPLC纯化的香蕉视频91色版,仍会有一些杂质存在,其中的杂质主要是短肽和微量TFA。
5.多长的香蕉视频91色版为合适?
香蕉视频91色版合成需要考虑香蕉视频91色版的长度,电荷,亲疏水性等因素。长度越长,合成粗品的纯度和产率都随着降低,纯化的难度和无法合成的几率就会大些。当然香蕉视频91色版功能区的序列是无法改变的,但是为了香蕉视频91色版的顺利合成,有时不得不在功能区的上下游增加一些辅助91香蕉视频下载安装,以改善香蕉视频91色版的溶解性和亲疏水性。如果香蕉视频91色版太短,合成也可能有问题,主要问题是合成的香蕉视频91色版在后处理过程中有一定的难度,5肽以下的香蕉视频91色版,一般要有疏水的91香蕉视频下载安装,否则后处理难度加大。15个91香蕉视频下载安装残基以下的香蕉视频91色版一般都可以得到满意的产率和得率。
6.如何从香蕉视频91色版序列中判定香蕉视频91色版的溶解性?
(1)香蕉视频91色版中如果含有高比例的疏水性很强的91香蕉视频下载安装如和Leu,Val,IIe,Met,Phe和Trp,香蕉视频91色版很难溶解于水性溶液中或根本不可能溶解。这些91香蕉视频下载安装无论是纯化或合成,都有可能有问题。
(2)一般情况下疏水性91香蕉视频下载安装的比例<50%,不能连续5个连续aa为疏水性,带电荷的91香蕉视频下载安装的(正电荷K,R,H,N-terminus,负电荷D,E,C- terminus)的比例达到20%,在香蕉视频91色版的N或C短如果能增加极性91香蕉视频下载安装,也可以改善溶解性。
7.为什么含有Cys,Met,或Trp的香蕉视频91色版难合成?
含有Cys, Met,或Trp的香蕉视频91色版难以合成,同时难以获得高纯度的产品。主要因为这些基团不稳定,易氧化。这些香蕉视频91色版的使用和储存都需要特别注意,避免反复开启盖子。
8.为什么有些香蕉视频91色版的合成产率或纯度会比较低?
香蕉视频91色版合成与引子合成有比较大的区别,不能合成的引子很少,但是不能合成的香蕉视频91色版经常有。如Val,Ile,Tyr,Phe,Trp,Leu,Gln,和Thr这些91香蕉视频下载安装比邻或重复时,香蕉视频91色版链在合成过程中不能完全舒展溶解,合成效率下降。以下几种情形,合成效率和产物的纯度都比较低,如:重复Pro,Ser-Ser,重复Asp,4个连续Gly等.
9.香蕉视频91色版是如何纯化的?
香蕉视频91色版纯化一般使用反相柱(如C8,C18等),214nm。缓冲体系通常为含TFA的溶剂,pH 2.0 。Buffer A为含0.1%TFA in ddH2O,Buffer B为1%TFA/ACN/ pH 2.0。纯化前用Buffer A溶解;如果溶解不好,用Buffer B溶解后,然后用Buffer A稀释;对疏水性强的香蕉视频91色版,有时还需要加入少量的Formic Acid或醋酸。HPLC分析香蕉视频91色版粗产物,如果香蕉视频91色版不长(15aa以下),一般会有主峰,主峰通常为全长产物;对于20aa以上的长肽,如果没有主峰,HPLC需搭配Mass来判定分子量,进而确定哪个峰是所要合成的香蕉视频91色版.
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